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flowjo权威发布_flowjo破解版(2024年12月精准访谈)

内容来源：友软网络所属栏目：观点更新日期：2024-12-02

flowjo

流式细胞术检测细胞周期全攻略细胞周期是指从细胞分裂产生的新细胞生长开始，到下一次细胞分裂形成子细胞结束的过程。这个过程主要分为Go、G1、S、G2和M期，其中M期又分为前期、中期、后期及末期。Go期是细胞休眠期，暂时离开细胞周期，停止细胞分裂，去执行一定的生物学功能。 𐟌€ 流式检测细胞周期的基本原理流式检测细胞周期的常用方法是检测DNA的含量。通过选择能与DNA结合的荧光染料，根据细胞各个时期DNA含量不同从而荧光强度不同的方法，检测出细胞周期。常用的染料有PI、7AAD、DAPI、Hoechst33258和DRAQ7等。 𐟔砦“作步骤离心收集细胞，预冷PBS洗细胞2次。将细胞悬液滴入预冷的70%乙醇中，于4℃固定过夜，或-20℃长期固定。离心收集细胞，PBS洗细胞1次。加入500ul稀释后PI染液（含1mg/mlPI，2mg/mlRNaseA），室温避光孵育30min。流式细胞仪检测：细胞计数2-3万个。使用Flowjo分析结果。 𐟚蠦𓨦„事项进样速度需要控制在低速以下，否则结果中可能没有S期存在。 PI染料具有细胞毒性，需在1小时内上机检测。 PI染料与DNA结合松散，洗涤可能会造成染料丢失。除非染色结果异常，无需洗涤。使用预冷乙醇固定时，向内加入细胞时，如果产生大量絮状物，说明细胞状态差，胞内DNA释放缠绕细胞，造成团块，需重新制备样品。 PI可与RNA结合，因此在染色时需加入RNA酶去除胞内RNA。 𐟓Š 数据分析 Flowjo分析结果时，需要注意CV值（变异系数），一般CV值越小，峰型越好，越尖锐。G2/G1的比值一般为1.8-2.0之间，若小于1.8，则细胞染色不充分。通过以上步骤和注意事项，可以准确地进行流式检测细胞周期的实验，并得到可靠的结果。

科研神器大放送！安装包直发，效率翻倍！ 𐟚€ 科研神器大集合！包括ImageJ（Fiji）、Photoshop、FlowJo V10、EndNote X9、Snapgene、Graphpad、SPSS和Origin等软件安装包，全部直发，无需繁琐的网盘下载！ 𐟓栥ㅥŒ…闪电发货，告别传统下载方式，让你的科研效率飞速提升！无论是数据处理还是文献管理，这些工具都能帮你轻松搞定。 𐟌Ÿ 学术生活从此变得流畅无比，科研效率翻倍提升！快来体验这份科研小确幸吧～

流式数据处理指南：从零开始到熟练嘿，大家好！今天我想和大家分享一下我初次接触流式数据处理时的经历。说实话，刚开始的时候真的是一头雾水，不知道从哪儿下手。希望我的经验能帮到那些和我一样迷茫的小伙伴们。第一步：了解基本概念 𐟓š 首先，你得搞清楚几个基本概念。流式数据处理主要是用来分析大量数据流的，比如生物实验中的细胞数据。你需要了解一些基本的参数，比如FSC-A、SSC-A、FL1-H等等。这些参数代表了不同的细胞特性，比如大小、形状和荧光强度。第二步：打开FlowJo 𐟖寸接下来，打开FlowJo软件。这个软件真的很强大，但也很复杂。一开始你可能只会看到一堆乱七八糟的图表和参数。别担心，这都是正常的。第三步：导入数据 𐟓‚ 把你实验得到的数据导入到FlowJo中。这一步很重要，因为你要分析的就是这些数据。导入后，你会看到各种不同的数据集和子集。第四步：设置门限 𐟚ꊦŽ夸‹来就是设置门限了。这个步骤非常关键，因为它决定了你的分析结果是否准确。你需要根据实验目的和已知的生物学知识来设定合适的门限。第五步：分析数据 𐟓ˆ 设置好门限后，就可以开始分析数据了。FlowJo提供了很多强大的工具来帮助你分析数据，比如统计不同细胞群体的数量和比例。第六步：导出结果 𐟓‘ 最后一步就是把分析结果导出到Excel或者其他格式的文件中，方便后续处理和展示。小结 𐟎‰ 总的来说，流式数据处理是一个非常复杂但非常有趣的过程。虽然一开始可能会觉得很迷茫，但只要一步步来，多实践几次，你一定会越来越熟练的。希望我的分享能帮到你们！如果有任何问题，欢迎留言讨论哦！

FlowJo制复合图秘籍想要在FlowJo中制作复合Histogram图？以下是详细步骤： 1️⃣ 首先，对流式文件进行分析，画出单独的Histogram图，并确定门的位置。 2️⃣ 接着，点击Edit➡Copy to Layout Editor，将需要复合的图表导入编辑器。 3️⃣ 按照顺序将需要叠加的图表拖动到同一位置，进行叠加。 4️⃣ 右键点击，选择最下方的Histogram➡Offset，调整图表位置。 5️⃣ 再次右键点击，选择Properties，进入设置界面。 6️⃣ 在弹出的对话框中选择Specify➡Y axis，选择你需要的模式： 𐟌Ÿ Auto模式：根据细胞绝对值count作图。如果细胞数差异很大，不建议使用此模式。 𐟌Ÿ Manual模式：手动选择展示的细胞数。同样，如果细胞数差异很大，不建议使用此模式。 𐟌Ÿ Modal模式：按照细胞所占上级比例作图。推荐用于同一管细胞中的不同细胞群体的同一标记。 𐟌Ÿ Unit Area模式：与Modal类似，但图中占比不同，可根据实际情况选择。 7️⃣ 在Legend下面有修改注释表包含内容的选项，可根据需要进行调整。 8️⃣ 最后，导出图片。按照以上步骤，你就可以轻松制作出复合Histogram图啦！𐟎‰

FlowJo插件大揭秘！𐟔 你还在只用散点图分析流式数据吗？FlowJo有超多强大的插件等你来探索！快来试试这些超实用的工具吧～ DownSample 这个插件可以帮助你降低数据的维度，让你更轻松地处理大量数据。 UMAP 使用UMAP技术进行无监督学习，发现数据中的隐藏模式。 FlowSOM 通过自组织映射（SOM）技术，对数据进行降维和聚类。 Dead TCells & BClls 这两个插件专门用于分析特定类型的细胞，帮助你更精准地研究。 ClusterExplorer 使用自我组织映射（Self-Organizing Maps）进行聚类，直观展示结果。 Phenograph 通过Phenograph算法，发现数据中的潜在簇。 FindAnomalies 这个插件可以帮助你找出数据中的异常值，进行异常检测。 ViolinBox 使用ViolinBox插件，进行密度估计和可视化。 FlowClean 自动化清洗FlowJo数据，去除杂质，提高分析质量。 StainIndex & FlowMeans 这两个插件分别用于计算染色指数和流式细胞仪数据的平均值。 CytoNorm 使用CytoNorm插件，标准化处理流式细胞仪数据。 EmbedSOM & Dead TCells & BClls 这些插件将FlowSOM映射到二维空间，进行无监督聚类。 TriMap & HyperFinder & CBA 这些插件分别用于三维映射、超参数寻找和细胞分析。快来试试这些FlowJo插件，让你的流式数据分析更加深入和全面吧！𐟚€

𐟓Š流式数据处理全解析𐟔 𐟒᤽ 是否对流式数据处理感到困惑？别担心，我们来帮你！𐟚€ 𐟔즬owjo分析出图，让你轻松解读流式数据。我们提供专业的flowjo教学指导，𐟓š精通多色流式技术，无论是凋亡、周期还是免疫学背景，我们都能帮你搞定！𐟒ꊊ𐟌᯸从Scatter到Viability，再到Leukocyte Gating，我们一步步指导你如何操作。想要更深入地了解免疫细胞panel？没问题，我们推荐合适的panel，让你轻松获取想要的实验结果。𐟎𐟔无论你是新手还是老手，只要你有流式数据处理的需求，我们都在这里为你提供帮助。快来加入我们，一起探索流式数据的奥秘吧！𐟌Ÿ

美国博士生的一天：充实又有趣今天真是充满活力的一天！早上7:30就起床了，八点出门和朋友一起去遛狗。上午8到9点之间，我们在外面散步，享受阳光和新鲜空气。 9:30一到实验室，我就直奔FlowJo，开始处理数据。从9:30到12:00，我一直在做幻灯片，准备下次的学术报告。中午12:00到12:30，我稍微放松了一下，摸了一会儿鱼。 12:30到1:30，我和实验室的小伙伴聊了聊天，交流了一下最近的实验进展和生活中的琐碎事情。1:30到2:30，我们开了一个小组会，讨论了一下实验的下一步计划。 2:30到5:00，我出去修车，顺便带狗子去了兽医那里，还跑了一些杂事。5:30到6:50，我们去狗公园玩了一会儿，狗狗们跑得可开心了。晚上6:50到11:30，我和朋友一起去吃饭、逛超市，还计划去芝加哥玩几天。今天真是充实又有趣的一天！总结一下今天的安排：和朋友一起遛狗、和小伙伴聊天、参加小组会、修车、带狗看兽医、外出吃饭和购物。科研时间大约3.5小时，社交时间8小时（和朋友1小时，和同事1小时），遛狗两次共计2小时。吃饭两顿，午饭自带，晚饭在外面解决。自我满意程度：⭐️⭐️⭐️⭐️⭐️ 今天真的很棒！和朋友一起遛狗、出去吃好吃的，准备迎接小长假。科研生活充满了挑战和乐趣，实验的下一步计划也很清晰。如果能有点独处时间锻炼一下就更好了。总体来说，今天的感觉非常棒！

Annexin V-PI染色，测凋亡！细胞凋亡是生物学中一个复杂但至关重要的过程，它涉及多种分子和染色方法。其中，Annexin V-PI染色是一种相对简单的双染方法，用于检测细胞凋亡。让我们深入了解一下这种方法的工作原理和操作步骤。 𐟔 细胞凋亡的标志细胞凋亡过程中，细胞核会变形、浓缩、碎裂，这可以通过Hoechst染色或DAPi染色来观察。此外，细胞膜也会发生变化，部分膜会包裹细胞内容物形成凋亡小体，这可以通过电子显微镜观察到。还有一种变化是细胞膜破损外翻，这可以用标记细胞膜内侧的染料来检测，配合检测细胞核内物质的染料进行双染，判断细胞凋亡的进程。 𐟒᠁nnexin V-PI染色的原理 Annexin V是一种钙依赖性磷脂结合蛋白，能够特异性结合凋亡细胞膜外层的磷脂酰丝氨酸。正常细胞的磷脂酰丝氨酸位于细胞膜磷脂双分子层的内层，而凋亡细胞的磷脂酰丝氨酸则位于外层。因此，Annexin V可以通过钙依赖的方式结合凋亡细胞的磷脂酰丝氨酸。 𐟧ꠦ“作流程制备细胞悬液：用不含EDTA的胰酶消化细胞，制备细胞悬液，2000rpm离心5分钟，弃上清。洗细胞：用PBS洗一次，再用1x binding buffer洗一次。调整细胞浓度：使用1x binding buffer将细胞浓度调整为1-5x10^6/ml。 Annexin V染色：取100ul细胞悬液，加入5ul荧光标记的Annexin V，室温避光孵育10-15分钟。洗细胞：用1x binding buffer洗一次，200rpm离心5分钟，200ul 1x binding buffer重悬细胞。 PI染色：加入5ul PI，混匀。流式测定：使用专用软件分析流式数据，得到凋亡细胞比例。 𐟓Š 数据处理与绘图定量分析：使用专用软件分析流式数据（可以使用flowJo），得到凋亡细胞比例。将3次独立重复的数据都分析完后进行统计分析并绘制柱状图。读图指南：在Annexin V-PI染色中，PI+细胞碎片代表晚期凋亡细胞，Annexin V+ PI-代表早期凋亡细胞，Annexin V+ PI+代表正常细胞。 𐟔젥𞋥ˆ†析例如，Jurkat细胞在经过抗Fas抗体处理后，可以通过Annexin V-PI染色来检测细胞的凋亡情况。通过对比不同处理条件下的细胞染色结果，可以定量分析细胞的凋亡比例。 𐟓Œ 小贴士在进行Annexin V-PI染色时，建议多加一组未染色的组，以便于寻找目标细胞群。在实验设计时，可以考虑添加阴性对照和空白对照，以增加实验的可信度。通过这些步骤和技巧，你可以精确地检测到细胞的凋亡情况，为生物学研究和药物开发提供有力支持。

FlowJo细胞周期分析全攻略𐟓Š 𐟓‚ 拖拽样本文件：将样本数据拖拽到FlowJo工作区。 𐟔 双击样本：双击一个样本，圈出主群。 𐟔— 去黏连：有两种选择，可以选择FSC-A和FSC-H进行去黏连，或者使用PI-A和PI-H数据。 𐟓ˆ 调整为直方图：选择PI-A作为X轴，调整坐标。 𐟔 选择细胞群：选择单个细胞群数据，选择细胞周期分析的小程序，并更换拟合模型。 𐟓Œ 模板应用：将分析好的细胞周期模板拖到所有样本。 𐟑€ 查看结果：逐个查看每个样本的细胞周期。 𐟓Š 细胞周期分析步骤：拖拽样本文件到FlowJo工作区。双击样本，圈出主群。选择FSC-A和FSC-H进行去黏连，或者使用PI-A和PI-H数据。调整为直方图，选择PI-A作为X轴，调整坐标。选择单个细胞群数据，选择细胞周期分析的小程序，并更换拟合模型。将分析好的细胞周期模板拖到所有样本。逐个查看每个样本的细胞周期。

𐟒ᦵ式补偿调节全攻略𐟒ኦ𕁥𜏨ᥥ🧚„调节，是不是让你感到头疼呢？𐟤”别担心，跟着我的步骤，轻松搞定！ 𐟔首先，实验前记得查找光谱查看器，像BD、Thermo、BioLegend这些大品牌都有哦！查看荧光之间是否存在溢出，哪些荧光溢出最严重，心里有数。 𐟔Œ补偿和电压息息相关，所以上机时电压一定要调好，这是关键一步！ 𐟒𛦎夸‹来，脱机调补偿的时候到了！你可以利用FlowJo或者DeNovo Fcs Express等三方软件来帮忙。这些软件能提供强大的数据分析功能，让你的补偿调节更加精准。 𐟤“还有疑问吗？或者想了解更多流式相关的内容？别担心，留言告诉我，我会一一回复！同时，我也会准备视频教程，展示如何在CytoFlex仪器软件及三方流式数据分析软件上调补偿的步骤。 𐟚€流式补偿调节，其实并不难！只要掌握了方法，轻松搞定！加油哦！𐟒ꀀ

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